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應(yīng)用案例

BeaverBeads? IDA-Ni固定His-CCA1蛋白進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)

BeaverBeads? IDA-Ni磁珠(#70501)是以瓊脂糖為基質(zhì)合成的磁性微球。磁珠表面固定有金屬Ni離子,能夠純化和固定His標(biāo)簽的蛋白質(zhì)。

BeaverBeads? IDA-Ni磁珠(#70501)是以瓊脂糖為基質(zhì)合成的磁性微球。磁珠表面固定有金屬Ni離子,能夠純化和固定His標(biāo)簽的蛋白質(zhì)。

  

圖1. BeaverBeads? IDA-Ni在顯微鏡中的成像,及蛋白純化效果。


中山大學(xué)陳月琴教授團(tuán)隊(duì)在Plant Physiology雜質(zhì)上發(fā)表論文,闡明了自然變異的miR397延長(zhǎng)擬南芥晝夜節(jié)律周期和控制開(kāi)花時(shí)間。miRNA miR397在被子植物中高度保守,在擬南芥中只有miR397a和miR397b,且只有miR397b能夠顯著延遲開(kāi)花。miR397b通過(guò)靶向酪蛋白激酶II亞基β3(CKB3)來(lái)控制開(kāi)花,進(jìn)而調(diào)節(jié)CCA1的晝夜節(jié)律。CCA1直接與miR397b的啟動(dòng)子結(jié)合并抑制其表達(dá),形成miR397b-CKB3-CCA1晝夜調(diào)節(jié)反饋回路。miR397b是擬南芥新進(jìn)化的遺傳變異,其靶向模式可能提高植物的適應(yīng)性。


實(shí)驗(yàn)利用BeaverBeads? IDA-Nickel磁珠純化His-CCA1蛋白,免疫沉淀CKB3蛋白,檢測(cè)OXmiR397b。

 

圖2. 野生型體外激酶OXmiR397b、OXCKB3、OXmiR397b×OXCKB3測(cè)定


 

圖3. miR397b與生物鐘相互作用的模型


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參考文獻(xiàn):

A Natural Variant of miR397 Mediates a Feedback Loop in Circadian Rhythm. Plant Physiol. 2020 Jan; 182(1): 204–214


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